twitter 裸舞共鸣发布！呼吸谈病原会诊纳入POCT、mNGS、tNGS、数字PCR

发布日期：2024-10-13 09:20 点击次数：191

twitter 裸舞2023年8月，中国医学科学院北京协和病院进修科徐英春、上海交通大学附庸瑞金病院呼吸与危重症医学科瞿介明为通讯作家的《成东谈主呼吸谈感染病原会诊核酸检测工夫临床哄哄各人共鸣（2023）》发布。共鸣指出：“呼吸谈感染性疾病在临床中极为常见，病原体的快速检测和精确会诊是其有用养息的前提。传统微生物学及免疫学工夫对呼吸谈病原体的检测机灵度偏低，核酸检测工夫的发展和临床哄骗大幅进步了呼吸谈病原体的会诊才智。” 图片twitter 裸舞一本大道香蕉大无l在线吗呼吸谈感染性疾病是临床

twitter 裸舞 2023年8月，中国医学科学院北京协和病院进修科徐英春、上海交通大学附庸瑞金病院呼吸与危重症医学科瞿介明为通讯作家的《成东谈主呼吸谈感染病原会诊核酸检测工夫临床哄哄各人共鸣（2023）》发布。共鸣指出：“呼吸谈感染性疾病在临床中极为常见，病原体的快速检测和精确会诊是其有用养息的前提。传统微生物学及免疫学工夫对呼吸谈病原体的检测机灵度偏低，核酸检测工夫的发展和临床哄骗大幅进步了呼吸谈病原体的会诊才智。”
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一本大道香蕉大无l在线吗呼吸谈感染性疾病是临床常见疾病类型，可分为上呼吸谈感染和下呼吸谈感染。上呼吸谈感染主要累及鼻腔、咽/喉部等，而下呼吸谈感染多为喉以下的气管支气管感染及肺部感染[1]。凭证全国卫生组织（World Health Organization，WHO）发布的 2019 年寰球前10位牺牲原因中，下呼吸谈感染位居第 4 位，导致 260万东谈主牺牲；且在低、中、中高和高收入国度组中，下呼吸谈感染是惟逐一类均位列前10位牺牲原因的感染性疾病[2] 。病原体的快速检测和准确会诊是感染性疾病有用养息的首要前提，但仅依靠传统微生物学及免疫学工夫，近70%傍边患者无法明确病原学会诊[3]。连年来，跟着病原体单靶标团员酶链反映（polymerase chain reaction，PCR）、以症候群为基础的病原体多重 PCR 工夫、微流控芯片工夫、数字PCR 工夫、宏基因组高通量测序（metagenomics next generation sequencing，mNGS）工夫以及多重病原靶向测序（targeted next-generation sequencing，tNGS）工夫的哄骗，大幅进步了呼吸谈感染性疾病的病原会诊才智，在病原体致病因子、耐药基因检测等方面也取得了首要进展[3-5]。基于以上原因，中华进修医学培训工程各人委员会蛊卦中华医学会呼吸病学分会，邀请我国呼吸科、感染科、临床微生物进修和分子进修等限度各人，共同制定了《成东谈主呼吸谈感染病原会诊核酸检测工夫临床哄哄各人共鸣（2023）》。该共鸣对不同分子会诊工夫的脾性和适用鸿沟，以及该类工夫在不同类型成东谈主呼吸谈感染疾病中的哄骗战术给出了明确推选概念，以期更好地率领临床实施。1 共鸣酿成要道共鸣各人组由中华进修医学培训工程各人委员会和中华医学会呼吸病学分会委员推选产生。2021 年 12 月召开共鸣启动会，就共鸣重要性问题拟定提纲及任务单干，组建共鸣握管组、撰写各人组、评审各人组。共鸣握管组以“呼吸谈感染（respiratory tract infection） ”“分子检测（molecular testing）”“分子会诊工夫（molecular diagnostic tests）”    为重要词，检索 PubMed 、中国知网、万方数据学问奇迹平台和维普数据库中的中、英文文献，经去重及阅读文献摘录和/或全文，共纳入55篇文献，酿成共鸣。中枢推选概念，见表 1。
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2 呼吸谈病原体核酸检测要道分子会诊工夫在呼吸谈感染性疾病，尤其是寰球搪塞新式冠状病毒大流行中，阐述了首要作用，高机灵度和高特异度的核酸扩增践诺（nucleic   acid    amplification  tests ，NAATs）已成为会诊新冠病毒感染的参考程序。跟着基因组学、工程学和纳米科学等前沿学科的交叉交融快速发展， NAATs 呈现出多种种种的检测要道和日眉月异的工夫技能，以 PCR 为基础发展出的及时荧光PCR、多重PCR、数字PCR和等温扩增工夫，以及高通量测序、基因芯片、核酸质谱、生物传感器等检测工夫，在大型实验室批量检测或现场核酸即时检测（point-of-care testing， POCT）中得以每每哄骗。除呼吸谈病毒外，一些系统还能检测细菌性肺炎的常见病原体及特定耐药基因。濒临诸多检测要道，临床医师和微生物实验室需审慎判断何时选拔何种要道或不同要道的组合，其决定成分包括流行病学、实验室资源、职责历程和检测资本等（表 2）。
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2.1 及时荧光 PCR 工夫及时荧光 PCR 工夫是一种可对核酸进行定量的践诺要道，其旨趣主如果通过及时采集荧光信号对核酸扩增进行监测。在 PCR 扩增的指数时期，模板的 Ct值与其肇始拷贝数存在线性关系，可杀青对未知样本的定量检测。2.1.1 临床哄骗场景主要适用于门急诊、入院患者和大东谈主群筛查，基于分子进修平台进行病原体（包括病毒、细菌、真菌、非典型病原体）的核酸检测，检测标本类型以鼻咽拭子、痰和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）为主。现存的商品化单靶标核酸检测病原体包括：新式冠状病毒、鼻病毒、嗜肺军团菌、耶氏肺孢子菌等；多靶标核酸检测病原体包括：呼吸谈合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、副流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、结核分枝杆菌等。2.1.2 工夫脾性行动传统的经典定量分析要道，荧光探针法的机灵度和特异度显然优于底物发光法，但特异性引物探针的资本和对仪器的要求较高。其已矣判读较为复杂，需要对扩增弧线和融解弧线进行分析。2.1.3 性能考证要求定量检测需考证的性能目标包括：正确度、精密度（包括测量重迭性和测量中间精密度）、不笃定度、特异度（包括抗烦闷才智）、机灵度、检出限、定量限、线性区间（可讲述区间）等。定性检测需考证的性能目标包括：要道合适率、检出限、抗烦闷才智、交叉反映等[8] ，具体性能目标以产物说明书要求为准。2.2 等温扩增工夫相较传统 PCR 变温工夫，等温扩增工夫频繁不需要篡改反映温度，该工夫决策多、工夫旨趣各别较大，且各具上风，但基愉快趣仍所以特异性酶和引物进行扩增。等温扩增工夫大多为指数扩增，当今多为定性检测[9]。2.2.1 哄骗场景主要适用于发烧门诊、急诊患者上呼吸谈感染病毒（如新式冠状病毒、流感病毒等）及下呼吸谈感染细菌（如肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等）的快速筛查。2.2.2 工夫脾性等温扩增反映频繁耗时短，扩增恶果高，不需要 PCR 轮回仪[10]且操作简便，但由于其工夫的复杂性，尚难以一齐获胜用于临床。工夫局限性：(1) 在引物遐想上，环介导等温扩增工夫、交叉引物扩增工夫、链置换扩增、重组酶团员酶等温扩增工夫等较为复杂，且引物数目频繁>4 条；而滚环核酸扩增工夫妥协旋酶依赖性扩增工夫则相对容易；(2)需要额外进行核酸索求。2.2.3 性能考证要求频繁等温扩增为定性实验，需讲理中国及格评定国度认同委员会 GL039[11] 定性实验的考证要求：合适率≥90%；阴性和弱阳性样本精密度检测已矣完全一致；参照厂家说明进行靶基因检测，5 次重迭检测应 100%检出，20 次重迭检测应检出至少 18 次。2.3 数字 PCR 工夫数字PCR是一种不依赖于核酸外标的核酸统统定量工夫[12] 。其旨趣是通过微流控工夫，将场所核酸和 PCR 反映液溜达在多个反映单位内进行 PCR 扩增，以液滴形势进行检测的形式也被称为微滴数字 PCR 。该工夫通过检测扩增后每个反映单位的荧光信号强度，判断含有场所核酸的反映单位个数，基于泊松溜达蓄意肇始样本中的场所核酸分子数，杀青对核酸浓度的统统定量。2.3.1 哄骗场景可获胜定量检测样本中病原体个数，特别适用于低浓度样本、低品貌基因或突变基因的检测，也可行动质控要道评估其他分子检测产物的扩增恶果。2.3.2 工夫脾性无需程序弧线和程序品，可有用抑制临床样本复杂本底对扩增的烦闷，具有高超的重现性和准确度。其主要影响成分是 PCR 扩增和荧光信号分析，前者与PCR扩增恶果、扩增体系的建树联系；后者与检测器的机灵度、核酸拷贝数、被分割成的物理单位数以及反映单位数联系，反映单位数越多，机灵度越高。工夫局限性： (1)不同数字 PCR 给与的微流控单位分割工夫和耗材试剂具有顽固性，不同厂家试剂和平台的检测已矣存在各别，尚无可评估其定量已矣准确性的跨平台质控工夫及非数字 PCR 要道学质控；(2)依托荧光探针进行定量检测的要道受限于靶标通量；(3)由于该工夫检测机灵度为单分子水平，不适用于检测浓度相对较高的样本；(4) 数字 PCR 讲述审核限定，尤其是低品貌检测已矣的讲述原则，尚无定论。2.3.3 性能考证要求应使用泊松溜达蓄意靶标分子拷贝数，不同荧光通谈之间应不存在互联系扰。定量检测性能目标应包括：反映单位体积精密度、准确度、有恶果；样本检测重迭性、线性、动态鸿沟、机灵度。基于芯片的数字 PCR 芯片内应无气泡，阳性和阴性的就地溜达应得到视觉证据。微滴数字 PCR 单次反映生成的最小液滴数应合适厂商提议或用户自界说值[13]。2.4 核酸即时检测工夫核酸即时检测为 POCT 工夫中触及核酸检测的一大类工夫的总称，是核酸索求工夫和分子扩增工夫（包括及时荧光 PCR 、巢式 PCR、等温扩增、数字PCR等工夫）的融和。其最大脾性是将核酸的索求、扩增、检测均置于一个反映装配中，通过特定开拓对扩增信号检测，完成对靶标核酸的筛查。当今核酸POCT主要以全自动顽固不休系统为主。2.4.1 哄骗场景主要适用于发烧门诊、急诊、 ICU 和某些特定病区感染患者的病原体快速检测。与传统POCT不同，呼吸谈病原体核酸 POCT 需要对检测病原的生物安全进行评估[ 14]。流感病毒、肺炎衣原体、肺炎支原体、百日咳杆菌等呼吸谈病原体核酸 POCT 产物，已行动该类型代表产物问世。 2.4.2 工夫脾性核酸 POCT 的机灵度和特异度高于免疫学 POCT，但其资本较高。天然大部分核酸 POCT 产物为顽固体系，但仍需看重 PCR 混浊的可能性。此外，其检测开拓一般较小，便于佩戴，但也导致其通量较低，不适用于大东谈主群筛查，讲理大型病院临床检测需求常常需要配备多组开拓。2.4.3 性能考证要求定性检测性能考证目标至少包括：合适率≥90%  ；阴性和弱阳性样本精密度检测已矣完全一致；靶基因 5 次重迭检测应 100%检出， 20 次检测应至少检出18次。定量检测性能考证目标至少包括：至少 80%  的样本已矣偏倚在±7.5%区间内；批内和批间精密度讲理说明书鸿沟；线性区间讲理说明书鸿沟； 20 次检测中≥18 个检测已矣与参考值之间的偏倚在±7.5%区间内[8， 11]。2.5 病原体高通量测序工夫病原体高通量测序工夫是给与高通量测序工夫对临床标本中的核酸进行测序，通过与微生物参考基因组比对获取标本中的微生物物种组成、物种品貌等信息[15]。当今该工夫主要分为三类：无偏倚检测的 mNGS、检测多重病原体过甚耐药基因或毒力基因的tNGS 和获取某一种或多种病原体全基因组数据的高通量测序工夫（whole-genome sequencing ，WGS）。2.5.1 哄骗场景由于病原体高通量测序工夫复杂、已矣解读难度大且价钱振作，提议凭证临床需求在传统微生物检测的基础上选拔性使用[16- 18]，举例，需尽快明确病原学会诊时、当今可及的微生物进修技能无法明确会诊时、出现聚拢性呼吸谈传染性病例需进行病原体溯源时。2.5.2 工夫脾性病原体高通量测序工夫可对标本中的核酸片断进行物种遒劲，但其物种、耐药基因和毒力基因遒劲的准确性受标本采样、实验操作历程、病原体参考基因组数据库和生物信息学分析等多种成分影响[19] 。在临床讲述的解读过程中，除深切分析测序数据外，结合患者临床信息过甚他实验室数据详尽判断和辩认定植菌与牵累病原体亦十分重要[20-21]。2.5.3 性能考证要务实验室在开展病原体高通量测序临床检测前，需参考实验室自建要道的联系要求完成要道学建立和性能证据，结合预期临床用途建设预期性能目标，包括：（1）生信历程评估：最低测序数据量、准确率、调回率、精确率和 F1-Score 等；（2）全历程性能证据：配景核酸数据模子、阳性阈值、重迭性、最低检测限、抗烦闷力、相识性等；（3）临床评估：对一定数目的真确临床标本进行检测，笃定阴性算计价值和阳性算计价值[22-23]。3 成东谈主呼吸谈感染病原体会诊3.1 急性上呼吸谈感染急性上呼吸谈感染是由种种病毒和/或细菌引起的，主要骚动鼻、咽或喉部的一组急性感染性疾病，以病毒感染多见，如鼻病毒、呼吸谈合胞病毒、流感病毒、冠状病毒等，少数为细菌感染，以链球菌常见。临床症状不具有特异性，多以上呼吸谈卡他症状、咽部不适为临床推崇，可伴发烧、头痛、咳嗽等其他症状。3.1.1 是否推选急性上呼吸谈感染患者惯例病原学检查？需凭证疾病流行情况、患者病情严重进程、症状执续时刻、合并症情况、免疫遏制情景评估已矣、其他接济检查已矣的可参考性以及对预后的初步评判，决定是否对疑似急性上呼吸谈感染的上述患者进行检测。举例，新式冠状病毒肺炎或流感大流行时间，快速分子检测有助于预检分诊、镌汰就诊时刻、减少传染病传播风险；又如，当患者免疫功能严重受损，同期疑似流感样症状时，或者呼吸谈病毒检测可能会影响医师抗病毒药物或停用抗生素的决定时，需要对呼吸谈病毒进行检测[24]。3.1.2 急性上呼吸谈感染病原会诊有哪些推选？在流行风险高的季节，高危东谈主群（老年东谈主、儿童、孕产妇、合并基础疾病患者）进行流感病毒检测可能比教导性抗流感养息更经济[25] 。此外，快速的已矣反馈（如 2 h 内即出已矣的快速分子检测）好像镌汰患者门急诊就诊时刻，抑制流感传播风险，故意于传染病已矣[26]。3.2 气管支气管炎气管支气管炎指气管、支气管黏膜过甚周围组织的慢性非特异性炎症，常因病毒或细菌感染引起该疾病加重。主要推崇为长久咳嗽咳痰，伴/不伴呼吸清贫等推崇。该病临床特征特异性不彊，常需与慢性阻碍性肺疾病、支气管哮喘、支气管膨大症等疾病辩认，此时需结合肺功能、胸部CT等检查协助会诊。3.2.1 气管支气管炎患者进行病原学检测的指征包括哪些？关于反复急性加重、发烧伴有脓痰、病情评估需要入院诊治的患者，可商量细菌涂片或培养尽快明确病原学以率领抗生素哄骗。在流感病毒、新式冠状病毒等大流行时间，门急诊针对上述两种病毒的抗原检测或分子会诊工夫有助于快速分诊并率领断绝防控，幸免院内传播，但前者明锐性低于后者。关于免疫功能正常且存在入院风险的成东谈主患者而言，尽快给与多重 PCR 技术明确病原，可能会镌汰抗生素使用时刻和入院时刻[27] ，但儿童毛细支气管炎患者并不推选惯例病毒检测[28]。3.3  肺炎3.3.1 社区得回性肺炎我国成东谈主社区得回性肺炎（community-acquired pneumonia，CAP）常见病原体为肺炎链球菌、肺炎支原体、流感嗜血杆菌、肺炎衣原体、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌等，连年研究泄漏，病毒性肺炎在成东谈主 CAP   中占比高达15.0%~34.9%[29] ，归拢患者可同期合并细菌、病毒、真菌等病原体感染[30]。(1) CAP 患者需要侵入性病原学标本采集吗？重症 CAP 遴选机械通气养息的患者，若教导性养息无效，怀疑有特殊病原体感染，或经积极抗感染养息病情无好转，需与非感染性肺部病变辩认，可经支气管镜留取下呼吸谈标本进行病原学检测。肺炎合并胸腔积液，尤其是肺炎病灶同侧的胸腔积液可行胸穿进行胸水病原体检测。(2) 核酸检测工夫在 CAP 病原体会诊中的价值大吗？CAP 的致病菌培养常常耗时长，而苛养菌感染培养阳性率较低，因此核酸检测在会诊 CAP 病原学方面具有较大上风。若怀疑为支原体、衣原体、军团菌、病毒等感染时，可给与血清特异性抗原、抗体检测蛊卦核酸检测和分离培养；实时荧光 PCR、等温扩增、数字 PCR、高通量测序工夫可同期检测多种病原体，提供病原体分型、毒力基因和耐药基因等深切分析[1] ，如果临床倾向于 RNA 病毒感染，提议选拔 RNA 高通量测序。危重症患者同期开展惯例病原学检查辅以病原体核酸检测[18] ，两者可互相补充，故意于快速准确笃定致病原，更好地奇迹于临床。3.3.2 病院得回性肺炎/呼吸机联系肺炎病院得回性肺炎（hospital-acquired  pneumonia， HAP）/呼吸机联系性肺炎（ventilator-associated pneumonia， VAP）是我国常见的病院得回性感染[31] 。发生 HAP/VAP 后平均入院时刻、抗感染养息疗程均延迟，且入院医疗用度加多[32] 。我国 HAP/VAP 常见病原菌包括鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等，耐药菌较为常见[31]。(1) 是否推选 HAP/VAP 患者惯例留取标本行微生物学检查？临床会诊 HAP/VAP 后，应积极留取呼吸谈、血液、胸腔积液标本行微生物学检查。呼吸谈标本应尽可能先进行涂片镜检，再作念病原体培养、抗原及核酸检测等。(2) HAP/VAP 患者应通过非侵入性要道已经侵入性要道得回呼吸谈标本？非侵入性要道指经咳痰、鼻咽拭子、鼻咽吸取物或气管导管内招引汇聚标本。侵入性要道指经支气管镜留取下呼吸谈标本、经支气管镜或经皮肺穿刺活检留取组织标本等。关于 HAP 患者，应先通过非侵入性要道留取呼吸谈分泌物涂片及半定量培养，教导性养息无效、疑似特殊病原菌感染或给与非侵入性要道获得的呼吸谈标本无法明确病原体时，再通过侵入性要道采集标本行微生物学检查。VAP 患者由于存在东谈主工气谈，除惯例经气管导管吸取呼吸谈分泌物进行涂片、培养外，还可通过侵入性要道采集标本[如支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid ，BALF)、支气管毛刷等]进行定量培养。(3) 怎样蛊卦 mNGS 在临床会诊 HAP/VAP 患者中的价值？HAP/VAP 患者常见病原体为细菌，病原学会诊以传统培养为主，必要时可蛊卦多重 PCR、微流控芯片等多靶标病原体核酸检测，无需惯例进行mNGS 。仅在患者存在免疫缺陷、 3d内未通过传统微生物学检测得回明确病原学依据，且教导性抗感染养息无效时，商量进行以 DNA 检测为主的mNGS[17]。3.4 慢性阻碍性肺疾病急性加重慢性阻碍性肺疾病急性加重（acute  exacerbation  of  chronic  obstructive  pulmonary disease ，AECOPD）是慢阻肺病程中的常见和首要事件，频繁被形容为有慢性阻碍性肺疾病基础的患者出现呼吸谈症状的急性恶化而导致额外养息。其主要症状是气促加重，常伴有咳嗽加重、痰液分泌加多和/或痰液性状篡改，部分患者可伴有心悸、疲顿等不适，严重者可出现呼吸衰败和/或心功能不全的临床推崇[33] 。这些症状均费事特异性，因此需与其他肺内疾病（如肺炎、肺栓塞、气胸等）和肺外疾病（如心源性肺水肿、心律失常等）辩认。下呼吸谈细菌感染是 AECOPD 的常原谅因，常见致病菌包括流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌目细菌；相对有数的病原体包括肺炎衣原体、肺炎支原体、军团菌、金黄色葡萄球菌等，鼻病毒等呼吸谈病毒亦然 AECOPD的常见诱因[34-37]。3.4.1 是否推选 AECOPD 患者惯例送检痰涂片和/或痰培养？(1) 适于门诊养息的轻症患者不提议惯例送检痰培养。(2) 关于反复急性加重、运转抗菌养息疗效欠佳、需要入院养息的重度急性加重（尤其伴有脓性痰）以及有铜绿假单胞菌感染危急成分的患者，推选惯例送检痰涂片镜检和培养；应尽可能在启动抗菌养息或篡改养息决策前送检及格的下呼吸谈标本[33]。(3) 关于经充剖析痉、抗炎以及合理抗菌养息但仍养息失败的患者以及入院患者继发感染，推选积极排查耐药菌以及真菌、分枝杆菌等特殊病原体，进行惯例痰涂片镜检和培养、血清学以及结核分枝杆菌分子生物学检测。3.4.2 是否推选 AECOPD 患者惯例进行流感病毒、新式冠状病毒抗原和/或核酸检测？（1）关于 AECOPD 患者，不提议惯例进行流感病毒抗原和核酸检测。（2）关于有流行病学史、流感样症状或病情严重需要入院养息的 AECOPD 患者，推选尽早进行流感病毒、新式冠状病毒等呼吸谈病毒的抗原和/或核酸检测，核酸检测的明锐性高于抗原检测[33， 38]。3.5 肺结核及结核胸膜炎肺是结核分枝杆菌参加东谈主体的主要通谈，结核分枝杆菌通过吸入引起肺部感染。肺结核常常发展渐渐，临床推崇种种。肺结核的会诊并不简便，惯例实验室检查对其会诊匡助有限，胸部影像学具联系键价值，胸部 CT 比 X 线能提供更多有价值的细节。肺结核果真诊依靠细菌学检查，抗酸染色对结核分枝杆菌的诊断止境首要，但费事特异性，其他非结核分枝杆菌也可呈阳性；分枝杆菌培养是确诊要道。3.5.1 肺结核患者病原学检查的首选标本是什么？清新咳出的痰或教导痰是结核分枝杆菌抗酸染色和培养的首要标本。3.5.2 是否需对肺结核患者行气管镜检查？对无法获取及格痰标本的患者，气管镜检查获取 BALF 和防混浊毛刷标本尤其首要。3.5.3 是否需进行结核分枝杆菌核酸检测？核酸扩增工夫可行动结核分枝杆菌快速会诊要道[39]。好意思国疾病驻扎已矣中心提议对可疑活动性结核的涂片抗酸染色阴性患者，至少进行一次呼吸谈标本的结核分枝杆菌核酸检测[40] 。对涂片抗酸染色阳性患者，核酸扩增工夫则可匡助辩认结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌[41]。3.5.4 结核分枝杆菌核酸检测阴性不错摈斥肺结核吗？对涂片阴性、培养阳性的结核患者，痰标本结核分枝杆菌核酸检测的机灵度和特异度分别为 68%和 96%[42]。因此，一次核酸检测阴性已矣不及以摈斥肺结核的会诊。3.5.5 在当今临床环境下是否仍可进行会诊性抗结核养息？实质职责中仍有 16%的病例，在费事病原学已矣的情况下临床会诊肺结核并遴选会诊性抗结核养息[43]。3.5.6 结核性胸膜炎患者是否需要进行胸膜活检？胸腔积液亦然一种结核分枝杆菌感染的推崇。结核性胸腔积液频繁为渗出液并以淋巴细胞为主。胸水抗酸染色频繁阴性，胸水结核分枝杆菌培养阳性率可达50%傍边[44] ，胸水的结核分枝杆菌核酸检测具有高特异度和低机灵度。激烈推选怀疑结核性胸膜炎的患者遴选胸膜活检和胸水分枝杆菌培养。胸膜活检标本病理检查和分枝杆菌培养蛊卦会诊率可达 80% 。50%~97%的病例胸膜活检泄漏为肉芽肿， 40%~80%的病例分枝杆菌培养阳性[39]。3.5.7 怎样选拔结核特异性 PCR 或 tNGS /mNGS 进行结核分枝杆菌检测？结核特异性 PCR 与 tNGS /mNGS 对结核分枝杆菌的会诊才智一样。与传统要道比较， tNGS /mNGS 比结核特异性 PCR 蛊卦检测更具上风，能显赫改善结核和其他病原体的病原学会诊[45] ，tNGS 检测好像提供结核耐药基因的撑执。3.6 免疫功能受损东谈主群的呼吸谈感染免疫功能受损包括原发和继发的免疫功能受损，比如东谈主类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus ，HIV）感染属于原发性免疫功能受损，肿瘤、干细胞及实体器官移植和本身免疫性疾病长久使用糖皮质激素、免疫遏制剂等属于继发免疫功能受损。除常见病原体外，结核分枝杆菌、诺卡氏菌、巨细胞病毒、耶氏肺孢子菌、曲霉和隐球菌等契机性感染的几率更高[46]，契机性病原体感染后症状与体征归隐，尤其 HIV 感染、器官移植患者发生下呼吸谈感染时病原学组成愈加复杂，要求致病菌、有数病原体、羼杂感染发生的比例更高，此时患者病情更重、进展更马上。可商量多种要道并行送检，临床常需积极开展涵盖场所病原体的多靶标核酸检测或 mNGS 以尽早会诊致病病原体[47]。3.6.1 对免疫功能受损宿主是否推选进行 BALF 核酸检测？在教导养息的同期，应尽早开展支气管镜检查及支气管肺泡灌洗进行包括 PCR 或 mNGS 等在内的病原体检测，减少运转教导性养息对病原学检测已矣的影响。对 BALF 样本进行的其他微生物检查神气取决于患者临床推崇、影像学特征以及特定病原体感染的危急成分，进行包括细菌涂片和培养、真菌涂片和培养、细胞学分析、组织病理学等在内的病原学检查[48]。3.6.2 怀疑免疫功能受损宿主肺真菌感染时检测给与什么工夫？对侵袭性真菌感染的高危患者，提议行真菌荧光染色、真菌培养、血清学、分子生物学以致组织病理学检测。尤其真菌荧光染色、1，3- β-D-葡聚糖（G践诺）、隐球菌荚膜多糖抗原、血及 BALF 标本曲霉半乳甘霖聚糖（GM践诺）蛊卦核酸检测，可进步真菌检出率；关于不错得回组织病理学标本的患者也可行mNGS；如临床倾向肺孢子菌感染，可给与呼吸谈标本六胺银染色或PCR，蛊卦血清G践诺，以明确判断[49] ，BALF 及血标本 mNGS 也有助于会诊，但PCR或mNGS肺孢子菌阳性不行分手定植和感染，需要结合临床详尽判断。3.6.3 对免疫受损宿主合并肺部感染宿主，有必要开展血标本 mNGS 吗？免疫受损宿主肺部感染伴发菌血症的契机为 5%~10%，显然高于免疫功能健全宿主，此类患者出现重症 CAP 时，可同期进行 BALF 及血标本 mNGS ，以协助明确可能的致病菌；血标本 mNGS  检测特异度略高于 BALF ，机灵度低于BALF[50]。3.6.4 是否推选免疫低下宿主行 PCR 检测病毒感染？PCR  工夫具有较高的机灵度及特异度，对发展成有症状感染的会诊也有很高的阴性合适率，已成为检测病毒感染的程序要道。尤其推选在造血干细胞及实体器官移植后如期给与 PCR 要道进行病毒（包括巨细胞病毒、EB 病毒和其他季节性流行呼吸谈病毒）的动态检测[51-52]。4  小结成东谈主呼吸谈感染类型种种，不同感染类型及不同基础疾病患者病原谱各具脾性，在临床惯例诊疗过程中，应以患者临床症状体征为基础，蛊卦哄骗影学、传统微生物学、免疫学和分子生物学等检测工夫（表3），依据相应检测程序作出快速、精确会诊。分子生物学会诊工夫在临床的哄骗当今仍有较多问题亟待措置，尤其是对临床已矣的正确解读。不同检测工夫所提供的已矣具有不同临床意义，蛊卦哄骗可进一步进步病原学检测的机灵度和特异度，更好的讲解患者的病程发展并进行养息监测。
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作家孝敬：徐英春、瞿介明牵头制定共鸣框架；王瑶看重共鸣提纲编制，组织协调各人组成员对内容进行矫正并组织会议征询；陈新飞、沈宁、苏欣、吴文娟、王瑶、王一民、奕巧莲、张栋、张静、周华、周敏看重撰写共鸣草案；陈新飞、奕巧莲看重对各人概念进行汇总，并对共鸣内容进行完善；徐英春、瞿介明对共鸣全文进行最终审校并酿成共鸣终稿。
汇聚首发时刻： 2023-08-22 15:04:51
汇聚首发地址： https://link.cnki.net/urlid/11.5882.R.20230822.1348.002
【中图分类号】 R446.5；R51 【文献标志码】 A 【著述编号】 1674-9081（2023）05-000-00
DOI： 10. 12290 /xhyxzz.2023-0338
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